A Validated RP-HPLC-PDA with Buffer-Free Gradient Elution for Simultaneous Plasma Analysis of Trimethoprim and Sulfamethoxazole

Abstrak

Sebuah metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik (RP-HPLC) yang sederhana, hemat biaya, dan tervalidasi sangat penting untuk memantau terapi trimetoprim dan sulfametoksazol secara akurat. Namun, metode HPLC konvensional sering kali bergantung pada fase gerak yang menggunakan buffer dan aditif, yang dapat menyebabkan penyumbatan kolom dan memperpendek umur kolom. Untuk mengatasi masalah ini, kami mengembangkan dan memvalidasi metode HPLC fase terbalik dengan detektor fotodioda array (PDA), menggunakan fase gerak tanpa buffer dan tanpa aditif dengan elusi gradien. Preparasi sampel dilakukan dengan metode deproteinasi berbasis pelarut organik untuk meminimalkan efek matriks. Pemisahan kromatografik dilakukan menggunakan kolom ZORBAX Eclipse Plus C18 (250 × 4,6 mm, 5 µm) dengan fase gerak berupa asam asetat (pH 2,3), metanol, dan asetonitril pada laju alir 1 mL/menit. Deteksi dilakukan pada panjang gelombang 270 nm dengan waktu analisis total selama 17 menit. Metode analisis ini menunjukkan linearitas, presisi, dan akurasi yang baik, serta sensitivitas yang memadai untuk analit yang dituju. Pengujian stabilitas menunjukkan hasil yang baik pada berbagai kondisi penyimpanan, termasuk dalam autosampler, siklus pembekuan-pencairan, dan penyimpanan jangka panjang. Namun, larutan stok trimetoprim hanya stabil selama dua hari sehingga harus dibuat segar. Validasi penuh dilakukan sesuai dengan pedoman bioanalitik FDA dan ICH, yang mengonfirmasi kesesuaiannya untuk aplikasi klinis.